分子生物辞典之：核酸纯化-DNA

▋ DNA 浓缩基本知识

人们如今对 DNA 的分析，多半是通过多重 PCR、real-time PCR 和对贵重事件的研究来进行的，因此相比之下浓缩 DNA 比较关键性。相比之下的分析产物是获得相比之下的上游检测结果的必要条件。我们不必了解 DNA 浓缩系统的实习原理，然后针对后续应用选择最适合的化学反复。

DNA 浓缩典型的下一场

● 硫化样品从而释放出来 DNA● 将 DNA 分子与人体内、蛋白、单糖和 RNA 等其他分子分立● 保持 DNA 分子的持续性

DNA 是从并不相同陷入的下一场也并不相同。例如冰淇淋等牛奶，其里富含抑制性的氟化，如果这些氟化被已浓缩的 DNA 携带，则有可能抑制上游的检测。从革兰氏阳性细菌里分立 DNA 无需高效的硫化细菌厚厚的交联巨噬细胞壁。一定要确保你可用的 DNA 浓缩法则必需解决取样陷入的关键问题。

温馨若有：血浆和该组织取样在可用前需冷冻保存，以避开限制性对 DNA 的破坏。在取走一小部分进行 DNA 浓缩前需将某种原因后的血浆完全混合成。

DNA 浓缩基本处理过程

DNA 浓缩：硫化、转化和净化

硫化：破坏巨噬细胞或该组织-复合物管控-飞轮破坏-去垢剂管控

硫化：使蛋白变性人或失去活性-离子去垢剂、冷却、催化剂、尿素和抗病毒类-酵母（如酵母 K）

硫化：使诱发限制性-甘油（例如 EDTA）-酵母（例如 酵母 K）

转化与净化：分立 DNA-去掉其他小分子（如 RNA）-去掉蛋白 •有机提取 •皂析 •与固常与表现形式转化 -二氧化上皮细胞 -阴离子里介柱 -方向性胶体

转化与净化：从其他巨噬细胞物质里分立 DNA 的法则

■ 有机提取

当吡啶或吡啶: 氢氧化钠与巨噬细胞硫化物混合成时，就会形成两常与：水常与和有机常与。极性 DNA 分子带入极性常与或「水常与」，而变性人的蛋白和其他巨噬细胞散落则带入有机常与。

■ 皂析

皂可以让蛋白溶解，从而降更高其亲水性，然后变性人，变性人后的蛋白丧失导电性从而水合；通过离心法去掉水合的蛋白和巨噬细胞散落。常以的皂之外之外氯化钠、氯化钾或氯化铵。

■ 与固常与表现形式转化

绝大多数的 DNA 浓缩法则主要依据的原理是：通过选择性地与固常与表现形式转化, 从而从钝硫化物里浓缩 DNA。这类固常与表现形式之外二氧化表现形式和阴离子里介PVC。多半来说，可用固常与表现形式浓缩 DNA 比其他法则用时更较长、配置更便捷，因为不无需任何四氢呋喃，而且可以微型化和系统工程从而实现高通量。

与 DNA 转化的固常与表现形式类型

二氧化上皮细胞：DNA 就会在高溶解度离液皂（例如皂酸抗病毒）存有的情况下与二氧化转化，但是蛋白不就会。可以可用富含甲醇的净化液除去皂，然后在更高离子其中心的氢氧化钠（例如 TE 或水）里出头 DNA。

阴离子里介柱：浓缩的主要原理是 DNA 里带负电荷的氯化基团与里介柱上带正电荷的分子之间常与互作用。在更高皂条件下，DNA 与表现形式转化，而蛋白和 RNA（取决于所用的悬浮液）则被净化除去。DNA 可以用高皂悬浮液出头。

在胶体内层进行的 DNA 方向性分立：许多商品化试剂盒的实习原理是可用方向性胶体从氢氧化钠里释放出来 DNA。方向性胶体可以由二氧化等碳化制成，DNA 的转化和出头取决于皂溶解度或 pH。

DNA 、溶解度和持续性

纯的、比较简单的 DNA 对于许多上游测定至关关键性。常以检验 DNA 的常以法则是在 260nm 的频率东南侧（DNA 在该频率下有最大独脚收崖）测定取样独脚视星等。通过测定 280nm 频率东南侧的独脚视星等，并且算出 260nm 与 280nm 东南侧的独脚视星等之比，可以检测出浓缩反复里有可能可用到的或残留在取样里的其他有机氟化。荧光原料和 qPCR 是算出 DNA 溶解度并确定制成持续性的替代法则，主要在本指南后续关于小分子定量章节进行详尽讨论。

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